Методика выполнения измерений массовой концентрации сорбиновой и бензойной кислот в напитках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Свидетельство №23-08 от 04.03.2008
ФР.1.31.2008.01736

Назад к списку методик

1. Объекты исследования

Настоящая методика выполнения измерений распространяется на напитки (вино и виноматериалы, пиво-безалкогольные напитки и соки) и устанавливает определение массовой концентрации сорбиновой и бензойной кислот методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием спектрофотометрического детектирования.

2. Диапазон измерений

Диапазоны измерений массовой концентрации сорбиновой и бензойной кислот в пробе продукта представлены в таблице 1.

Таблица 1. Диапазоны измерения массовой концентрации сорбиновой и бензойной кислот в продукте.

3. Пробоподготовка

Отбор проб вина, напитков безалкогольных, сиропов, кваса, соков фруктовых, пива осуществляют в стеклянные емкости (колбы на 50 мл), предварительно вымытые и тщательно высушенные.

Пробоподготовка состоит из стадий отбора пробы и трехкратного фильтрования пробы через нейлоновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Трехкратное фильтрование обеспечивает удовлетворительную очистку пробы от сопутствующих веществ.

Для напитков, содержащих взвеси (квасы, соки и пр.) пробоподготовка состоит из стадий отбора пробы, центрифугирования и однократного фильтрования супернатанта через нейлоновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Хранение проб производят в стеклянных емкостях.

Блок-схема процедуры пробоподготовки

4. Проведение хроматографического анализа

4.1. Оборудование и условия для проведения ВЭЖХ-анализа градуировочных растворов сорбиновой и бензойной кислот, подготовленной пробы напитка.

Для хроматографического разделения сорбиновой и бензойной кислот следует использовать изократическую высокоэффективную хроматографическую систему со спектрофотометрическим детектированием в УФ-области.

При анализе сорбиновой и бензойной кислот допустимо использовать колонки различной длины (150 мм и 250 мм). Выбор той или иной колонки зависит от наличия их в лаборатории или от предпочтения аналитика.

Для проведения анализа предварительно готовят градуировочные растворы из ГСО или навесок солей; проводят пробоподготовку; подготавливают к работе прибор.

Оборудование:

Условия:

* При длине волны 254 нм детектируется пик сорбиновой кислоты, отклик пика бензойной кислоты очень слабый. Поэтому, при анализе бензойной кислоты, а также смеси сорбиновой и бензойной кислот детектирование следует проводить при длине волны 230 нм.

В рамках данной методики возможно определение таких компонентов как кофеин, аспартам, сахарин. При необходимости измерения их содержания в напитках, наряду с сорбиновой и бензойной кислотами, выбор длины волны детектирования обусловлен наличием в образце сильно окрашенных пищевых красителей.

Градуировку проводят по градуировочным растворам (во всем диапазоне определяемых концентраций) не реже 1 раза в квартал, а также при использовании новой партии реактивов, замене колонок и после ремонта хроматографа.

4.2. Определение количественного содержания сорбиновой и бензойной кислот в пробе.

Для определения количественного содержания компонентов пробы (сорбиновой и бензойной кислот) проводят хроматографический анализ одного из градуировочных растворов и далее хроматографический анализ подготовленной пробы. Для достоверности измерений хроматографический анализ как градуировочного раствора, так и подготовленной пробы проводят не менее 2 раз подряд.

Используя установленное программное обеспечение – «МультиХром для Windows XP» в отчете или над пиком (в зависимости от установок опций «ВИД») по окончании измерения автоматически определяется результат в виде концентрации определяемых кислот. Для получения результата необходимо провести два параллельных измерения (получить две хроматограммы).

Массовую концентрацию анализируемых кислот (мг/л) рассчитывают как среднее арифметическое значение из двух параллельных измерений.