Аналитическое и лабораторное оборудование

Методика выполнения измерений массовой доли охратоксина А в пищевых продуктах, продовольственном сырье и комбикормах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Свидетельство №42-09 от 21.08.2009
ФР.1.31.2012.13727

Назад к списку методик

Описание

Комплект оборудования

Свидетельство

Хроматограммы

1. Объекты исследования

Настоящая методика устанавливает метод измерений массовой доли охратоксина А в зерне, зерновых, крупяных, зернобобовых и масличных культурах, муке, крупе, хлебе, хлебобулочных и макаронных изделиях, орехах, комбикормах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

2. Диапазон измерений

Диапазоны измерений массовой концентрации охратоксина А в различных объектах указаны в таблице.

Наименование объекта	Диапазон измерений массовой доли охра- токсина А, мг/кг	Показатель точности (границы относительной погрешности), ±δ, %, при Р=0,95	Показатель повторяемости (относительное среднеквадрати- ческое отклонение повторяемости), σ_r, %	Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадрати- ческое отклонение воспроизводимости), σ_R , %	Предел повторяемости, r, %, P=0,95, n=2
Зерно, зерновые, крупяные, зернобобовые и масличные культуры, мука, крупа, хлеб, хлебобулочные и макаронные изделия, орехи, комбикорма	от 0,0005 до 0,005 вкл.	35	10	15	28
	свыше 0,005 до 0,02 вкл.	25	5	10	15

3. Пробоподготовка

Подготовка проб к измерениям включает следующие этапы:

первичное извлечение охратоксина А из пробы;
экстракция охратоксина А из пробы методом твердофазной экстракции;
очистка пробы на ТФЭ-картридже;
– элюирование охратоксина А с ТФЭ-картриджа и подготовка пробы для ввода в хроматограф.

Для анализа готовят две параллельные пробы.

Блок-схема процедуры пробоподготовки

4. Проведение хроматографического анализа

4.1. Оборудование и условия для проведения ВЭЖХ-анализа градуировочных растворов охратоксина А и подготовленной пробы

Для хроматографического определения охратоксина А необходимо использовать изократическую высокоэффективную жидкостную хроматографическую систему с флуориметрическим детектором.

Для проведения анализа предварительно готовят градуировочные растворы охратоксина А; проводят пробоподготовку; подготавливают к работе прибор.

Оборудование:

хроматограф жидкостный «Стайер» с флуориметрическим детектором;

персональный компьютер с установленным программным обеспечением «МультиХром» версии 1.5 или 2х

Условия:

изократический режим;

колонка: «Synergi Hydro-RP» 4 мкм 250х4,6 мм (Phenomenex, США);

защитная колонка: «С18 Aq» или «С18» 4x3,0 мм (Phenomenex, США);

подвижная фаза: раствор аммония хлористого молярной концентрации 20 ммоль/дм³, pH 9,6–9,8 – ацетонитрил (81,5:18,5);

скорость потока: 0,75 см³/мин;

объем петлевого дозатора: 20 мкл;

температура: комнатная;

детектирование: флуориметрическое, λex 365±2 нм, λem 405-600 нм.

Градуировку проводят по градуировочным растворам во всем диапазоне измеряемых концентраций не реже 1 раза в месяц, а также при использовании новой партии реактивов, замене колонок и после ремонта хроматографа.

4.2. Определение количественного содержания охратоксина А в пробе

Для получения результата измерений проводят анализ двух параллельных проб, для каждой из которых выполняют по два измерения (получают по две хроматограммы). Результат измерений (С) – массовая концентрация охратоксина А в пробе, введенной в хроматограф, рассчитывается автоматически системой сбора и обработки хроматографической информации.

Если массовая концентрация пробы, введенной в хроматограф, оказывается больше верхней границы диапазона градуировки (50 нг/см³), пробу перед вводом в хроматограф разбавляют подвижной фазой, но не более, чем в 10 раз. Разбавление учитывают при расчете.

Рассчитывают среднее арифметическое значение массовой концентрации охратоксина А в пробах, введенных в хроматограф (C1 и C2), по результатам двух измерений для каждой из параллельных проб по формуле

С_ср = ( С₁ + С₂ ) / 2

Массовую долю охратоксина А в анализируемой пробе С_пр, [мг/кг] рассчитывают по формуле:

где:
С_ср – среднее значение массовой концентрации охратоксина А в пробе, введенной в хроматограф [нг/см³];
V₁ – объем толуолового экстракта 50 см³;
V₂ – объем пробы, взятой на анализ 25 см³;
V₃ – измеренный объем пробы [см³];
M – масса пробы 10 г;
K_экстр – коэффициент твёрдофазной экстракции 0,75;
10^-3 – коэффициент пересчета в мг/кг;
K_разб – коэффициент разбавления.

За результат измерений принимают среднее арифметическое значение массовой доли охратоксина А в двух параллельных пробах.

Свидетельство №42-09 от 21.08.2009ФР.1.31.2012.13727

Свидетельство №42-09 от 21.08.2009
ФР.1.31.2012.13727